Microscopio laser a scansione confocale

Questi microscopi consentono di superare via via alcuni limiti dei microscopi a fluorescenza e di quelli ottici.

In un microscopio ottico convenzionale la sorgente luminosa illumina una vasta area del campione e rende visibili tutti gli elementi presenti nel campo. L’immagine può risultare scura, indistinta e fitta di oggetti non tutti a fuoco. Nel caso del microscopio laser a scansione confocale otteniamo un’immagine molto più nitida.

Funzionamento del microscopio a scansione confocale

Nel microscopio confocale un raggio laser focalizzato colpisce un punto del campione, solitamente trattato con sostanze fluorescenti. La luce emessa dal campione illuminato con il laser viene raccolta su un piano, mentre la luce fuori fuoco proveniente dalle aree del campione situate sopra e sotto il piano del fuoco viene praticamente bloccata, consentendoci di avere un’immagine nitida e ben visibile.

Osservando un campione in cui abbiamo più batteri stratificati possiamo mettere a fuoco un determinato piano. Con la manopola del fuoco possiamo decidere quale struttura mettere a fuoco mentre tutto il resto rimarrà sfocato (al microscopio ottico e a quello a fluorescenza questo non si può fare).

Il metodo di formazione dell’immagine in un microscopio confocale differisce da quello di un microscopio ottico composto convenzionale per il fatto che, mentre nel secondo il fascio di illuminazione investe l’intero campione e forma istantaneamente l’immagine sul rivelatore, nel primo la luce proveniente dalla sorgente illumina l’oggetto in un solo punto per volta ed è necessaria una scansione per formare l’immagine finale.

Il puntatore laser si muove su tutti i punti del piano come una sorta di scanner, formando l’immagine di questo piano che viene registrata e messa da parte. Dopo di che il laser cambia piano (va su quello inferiore, superiore ecc perché abbiamo un campione pluristratificato) mette a fuoco e fa la scannerizzazione. Dopo di che il microscopio mette insieme tutte le immagini e viene fuori un’immagine tridimensionale con tutti i piani a fuoco.

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