Diagnosi microbiologica diretta

I campioni biologici prelevati dai pazienti devono essere trasportati in laboratorio, dove attraverso una serie di procedure si verifica la presenza di batteri patogeni. La ricerca dei batteri può essere sia di tipo diretto che di tipo indiretto. Leggi i nostri appunti sulla diagnosi indiretta

Nella diagnosi microbiologica diretta l’obiettivo è isolare e identificare all’interno campione biologico l’agente infettante o suoi specifici prodotti (diagnostica molecolare) come:



Esame microscopico

Nella diagnosi diretta si può fare un esame microscopico. L’osservazione microscopica di batteri, miceti e protozoi può essere eseguita su campioni a fresco o colorati. Questo permette:

  • di distinguere le forme batteriche da quelle fungine e parassitarie;
  • di stabilire il successivo iter diagnostico necessario alla identificazione del ceppo microbico;
  • di acquisire sufficienti informazioni per formulare una diagnosi provvisoria tale da consentire una prima indicazione terapeutica.

Nell’osservazione di preparati a fresco si utilizzano preparati liquidi o campioni stemperati in soluzione fisiologica. L’esame a fresco permette di determinare forma, disposizione e motilità dei microrganismi. Questi parametri sono molto importanti per la diagnostica.

Se vogliamo avere informazioni sulle caratteristiche tintoriali o se vogliamo aumentare il contrasto possiamo allestire dei preparati colorati. La colorazione è una reazione che avviene fra i costituenti della cellula batterica (amminoacidi, carboidrati, lipidi, sali organici) e il colorante. Si definisce colorante qualunque composto organico capace di combinarsi con un’ampia varietà di sostanze cedendo loro il colore. Affinché ciò possa verificarsi, è necessario che nel composto siano presenti:

  • Gruppo cromoforo: rende il composto colorato
  • Gruppo auxocromo: gruppo che si lega alla cellula.

Nei procedimenti di colorazione, la prima fase è la preparazione di uno striscio di materiale appropriato per evitare che esso sia asportato dai liquidi coloranti e di lavaggio. Operazioni da eseguire per una corretta preparazione di uno striscio:

  • Distensione;
  • Essiccamento;
  • Fissazione;
  • Colorazione;
  • Asciugamento.

Leggi qui per approfondire il discorso sulla colorazione dei vetrini



Per l'osservazione con il microscopio è importante fissare il vetrino
Meccanismo di fissazione del vetrino

Utilizzo dei terreni di coltura

La semplice osservazione al microscopio ottico di un preparato proveniente da un sito o fluido corporeo con sospetta infezione in atto non consente di porre una precisa diagnosi di genere, specie e sensibilità ai chemioterapici.

Pertanto è necessario che i batteri siano fatti crescere in coltura ed isolati al fine di stabilire con precisione le caratteristiche morfologiche, immunologiche e biochimiche. I terreni di coltura:

Leggi anche: terreni usati in microbiologia clinica



La scelta dei terreni dipende dalla conoscenza della flora microbica normale presente nel campione in esame e dalla valutazione dei possibili patogeni da isolare. La crescita batterica su terreno solido è evidenziata dallo sviluppo di patine o colonie isolate sulla superficie dell’agar. Lo sviluppo batterico in terreno liquido è evidenziato dall’intorbidimento del terreno.

Dopo aver identificato la specie batterica solitamente si procede con l’antibiogramma, per analizzare la sensibilità del patogeno ai diversi antibiotici.

Libro di testo

Per lo studio della microbiologia applicata potete utilizzare o microbiologia medica, oppure sempre il Brock è un ottimo libro di testo.

 

Autore dell'articolo: Admin

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